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检测elisa法的实验原理

阅读次数:808发布时间:2013/3/25 9:24:08下载文件

[实验原理] 

采用ELISA法,血清加到包被纯化的肺炎衣原体抗原的微滴孔中,使之发生反应,然后去除未结合的抗体,加入结合有HRP的抗人Ig抗体使之与已结合的抗体反应,结合的HRP与发色底物发生颜色反应。最后,终止底物反应,在酶标仪上读出光密度值。

[标本准备] 
取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验,分离血清后将其保存于一20℃环境中。检测时,使样本恢复至室温。

[试剂]
1.预包被微孔板
2.阳性对照
3.弱阳性对照
4。阴性对照
5.标本稀释液
6,浓缩酶联物
7,底物AB
8.终止液

[仪器]
酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

[操作步骤
1.本实验结果须结合临床表现、病史作出诊断后,方可采取适当临床处理。
2。试剂盒虽然含有消除干扰因子的物质,但仍可能有少量标本难以除尽干扰。因此,如某标本多项IgM均为阳性,应考虑RF的干扰。


4.将稀释标本置37℃环境中20min
5。各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中,空白对照孔加100u1标本稀释液,盖好反应板,置37℃环境中30min
6。甩尽板中液体,每孔用200300ul洗涤液洗5次,每次均需拍干。
7.每孔加酶联物100~1,盖好反应板,置37℃环境中30min
8.甩尽板中液体,洗5次,每次拍干。
9.加底物AB1滴或各50tzl,混匀,置37℃环境中15min
10.取出,加终止液1滴,用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液,直接判断结果。

[注意事项]
1.配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中,长期可存于2—8℃环境中。
2.配制酶联物 按1101倍稀释,即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量),未用完的丢弃。
3.待试剂盒平衡至室温后,待测标本按151稀释,即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。

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