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血清的制备与使用

阅读次数:132发布时间:2021/3/23 14:28:16

一、血清的制备方法问题。

1、问:我的实验需要自己制备一些血清用于培养细胞,有没有人知道用于培养细胞的血清需要怎样的制备过程?

答:自己制备血清当心污染啊。如果无菌条件好的话,用静置析出方法就行。

2、问:一般我们用得胎牛血清用前还要灭活,我想用大鼠的血,不知道要不要灭活?

答:你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜,离心,取上清,在无菌过滤,也可灭活,然后分装冻存,用时再配。

3、问:如果灭活会不会对血清中的一些因子有损伤?

答:加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。灭活一般不会对血清中的一些因子损伤的。


二、心肌细胞原代培养时血清的使用问题。

1、问:在进行心肌细胞原代培养时,需要用含血清的培养基中止胰酶的消化作用,我现在使用的是含血清10%的培养液,但近日看北医一个细胞培养的课件发现,有用1%血清培养液进行中止消化的,想问一下,1%的是否可以,效果是否有保证?这样确实能节省不少血清的。

答:关于心肌细胞元代培养的FBS问题:

(1)1%的血清完全培养基可不可以,得看你胰酶的用量。但是在心肌细胞元代培养就不行。 10%的FBS完全培养基效果都不太好,开始心肌细胞元代培养需要高浓度的FBS,20%左右,但这就有出现另一个问题,在FBS完全培养基中,成纤维细胞呈优势细胞,须得在培养基加入适量的BrdU以抑制其生长,纯化心肌细胞。

(2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶,只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

(3)元代心肌细胞培养的FBS使用,有讲究:刚开始使用20%左右的高浓度的FBS,后逐渐递减为无血清的DMEM/F-12培养基培养。

2、问:我胰酶的用量是0.08% ,并混和了0.08%的胶原酶。FBS要高浓度递减是否是说的在细胞培养中啊,难道在消化时终止也需要如此高的浓度吗,还有,我的BRDU只用到48小时就不用了,因为担心其损伤太大,可以持续用多久呢?

答:我用10%FBS终止的,然后差速1h,然后还是用10%FBS的HG-dmem养的,没有用brdu,心肌细胞还是比较多和稳定的,我第3天就可以用,第2天晚上看就会有搏动。

原创作者:上海劲马实验设备有限公司

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