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劲马生物|ELISA试剂盒PCR反应的五要素都是哪些?

阅读次数:529发布时间:2022/5/31 16:40:09

       Elisa试剂盒参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
 
  引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
 
  ①引物长度: 5-30bp,常用为20bp左右。
 
  ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至0kb的片段。
 
  ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
 
  ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
 
  ⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
 
  ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
 
  ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
 
  引物量:每条引物的浓度0.~umol或0~00pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
 
由于篇幅有限,详情请关注“劲马生物”微信公众号或官网留言,也可以咨询我司业务员了解哦!

原创作者:上海劲马实验设备有限公司

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