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劲马为您总结小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养方法

阅读次数:421发布时间:2021/3/16 14:22:48

平滑肌即无纹肌的通称,平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官,而只是成为构成体壁和内脏壁的因素(肌层)。平滑肌细胞互相连接,形成管状结构或中空器官;在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形,也可产生连续收缩或紧张性收缩,使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。


小鼠支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关.如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时,可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大,表型也发生改变,由收缩型转为合成型与分泌型,并分泌多种与细胞因子;而且出现向气管腔迁移的迹象。


小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养

1.取4-5周龄的小鼠,断颈处死后,泡于75%的酒精中
2.剖开胸腔,取出完整气管及肺组织,放入无菌PBS中
3.在体视显微镜下,小心分离出下游支气管
4.用眼科剪及镊子分离肌层并剪碎
5.加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃过夜消化
6.第二天置于37℃水浴摇床中消化2~3h
7.待液体变浑浊后加入完全培养基终止消化,充分吹打
8.过100目筛网,收集滤液,1000rpm离心5min,弃去上清
9.用完全培养基重悬沉淀,铺瓶。

 

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原创作者:上海劲马实验设备有限公司

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