ELISA实验做了很多次，可是结果还是有偏差？可能很多同学都会出现这样的问题，那么问题到底出在哪呢，今天小编就来给大家总结一下，ELISA实验中会经常遇见的问题。

一、ELISA简介
酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称 ELISA）是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

二、ELISA的应用
1.免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成份。

三、ELISA实验疑难问题解答

1.非正常的样本值

①不正确的收集或保存
解决方案：确保正确的底物体积混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定时间内使用。
②不正确的样本制备
说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书推荐进行。确保使用正确的校正稀释液。

2.信号强度增长不充分

①底物准备有误
解决方案：确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定时间内使用。
②每孔底物添加体积有误
解决方案：保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。
③孵育时间或温度有误
解决方案：严格按照推荐的孵育时间和温度进行实验，避免在环境条件变化的位置孵育96孔板（如放在通风处或窗台边）。
④偶联物或底物准备有误
解决方案：确保混合相同体积的偶联物和底物。加入后会立即显色。底物在使用前应避光保存。
⑤仪器设置不正确
解决方案：确保酶标仪使用了正确的滤光片，确保按照说明书，正确的配置仪器参数。

3.边缘效应

①工作台温度不均衡
解决方案：避免在环境条件变化的位置孵育，如放在通风处或窗台边。
②体系液体蒸发
解决方案：保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。
③叠板
孵育时避免叠板。

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