大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）水平。用纯化的大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子β（TNF-β），再与HRP标记的肿瘤坏死因子β（TNF-β）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子β（TNF-β）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）浓度。
使用目的：
大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中小鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）含量。

自备材料：
1.  蒸馏水。
2.  加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.  振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处理及保存方法：
1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒操作注意事项：
●   试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
●   使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
●   底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
●   加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒安全性：
1.   避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2.   实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.   不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒操作步骤：
1.   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8.   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。

结 果 判 断 与 分 析：
1、  仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、  以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的IFN-Α标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的IFN-Α含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
产品详细说明书以上海劲马生物科技有限公司的说明书为准,大鼠肿瘤坏死因子β试剂盒说明书索取方式:021-60449724，13817140470

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