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操作注意事项：

 ●   试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

●   使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

●   底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

●   加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 

安全性： 

1.   避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2.   实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3.   不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 

试剂的准备： 

1.   标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

 2.   洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。 

试剂盒性能： 

1.   灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2.   特异性：不与其它细胞因子反应。

3.   重复性：板内、板间变异系数均小于10%。 

操作步骤：

 1.   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8.   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。