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产品简介: 产品名称:白细胞粘附蛋白抗体英文名称:Anti-CD18产品编号:B-02100产品规格:0.1ml/0.2ml单克隆抗体具有单一特异性,仅识别一个表面位点。所有R&DSystems的单克隆抗体都是来自杂交瘤培养上清,而非腹水,且经过蛋白A或蛋白G柱的纯化。 多克隆抗体具有多个表位识别位点。抗血清和全免疫球蛋白(Ig)含有大量的非特异性Ig,从而会导致非特
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产品名称:白细胞粘附蛋白抗体
英文名称:Anti-CD18
产品编号:B-02100
产品规格: 0.1ml/0.2ml
单克隆抗体具有单一特异性,仅识别一个表面位点。所有R&D Systems的单克隆抗体都是来自杂交瘤培养上清,而非腹水,且经过蛋白A或蛋白G柱的纯化。
多克隆抗体具有多个表位识别位点。抗血清和全免疫球蛋白(Ig)含有大量的非特异性Ig,从而会导致非特异性的抗体结合。抗原亲和纯化柱去除了非特异性IgG,使特异性IgG提高了十倍效力。
单克隆抗体的制备过程:
1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。
2)骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活)。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养,融合前24h换液一次,使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3)细胞融合的关键: 1技术上的误差常常导致融合的失败。例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
2融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个干净的环境,以及适宜的无菌操作技术。
4)阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测,过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质,以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便,RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次,均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5)克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的,有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。
动物免疫
细胞融合
克隆筛选
交杂瘤细胞的克隆化
腹水制备与单抗纯化
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