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酶联免疫吸附测试-人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA检测试剂盒
阅读次数:1048发布时间:2012/8/11 11:09:27
SYSTEMS® 中文说明书 UNIONHONEST
酶联免疫吸附测试 Enzyme linked lmmunosorbent Assay
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人抗白蛋白抗体ELISA试剂盒 是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知AAA浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将AAA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中AAA的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份 | 96孔配置 | 48孔配置 |
96/48人份酶标板 | 1块板(96T) | 半块板(48T) |
塑料膜板盖 | 1块 | 半块 |
标准品:200ng/ml | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) |
空白对照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) |
标准品稀释缓冲液 | 1瓶(8.0ml) | 1瓶(4.0ml) |
生物素标记的抗AAA抗体 | 1瓶(8.0ml) | 1瓶(4.0ml) |
亲和链酶素-HRP | 1瓶(12ml) | 1瓶(5ml) |
洗涤缓冲液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) |
终止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) |
样品收集、处理及保存方法:
1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒操作注意事项:
● 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
● 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
● 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
● 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
试剂的准备:
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
200 ng/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
100 ng/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
50 ng/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
25 ng/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
12.5 ng/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
6.25 ng/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0 ng/ml | (空白对照) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
试剂盒性能:
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
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