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酶联免疫吸附测试-人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA检测试剂盒

阅读次数:1048发布时间:2012/8/11 11:09:27

  

 SYSTEMS®     中文说明书                   UNIONHONEST

                酶联免疫吸附测试  Enzyme linked lmmunosorbent Assay

_____________________________________________________________________________________

  抗白蛋白抗体ELISA试剂盒 是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA.已知AAA浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将AAA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物AB,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中AAA的浓度呈比例关系。 

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份

96孔配置

48孔配置

96/48人份酶标板

1块板(96T

半块板(48T

塑料膜板盖

1

半块

标准品:200ng/ml   

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

空白对照

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

标准品稀释缓冲液

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

生物素标记的抗AAA抗体

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

亲和链酶素-HRP

1瓶(12ml

1瓶(5ml

洗涤缓冲液

1瓶(20ml

1瓶(10ml

底物A

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

底物B

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

终止液

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

样品收集、处理及保存方法 

1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2  血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3  细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4  组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。

 5  保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 

人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒操作注意事项 
●   试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

●   使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器。

●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

●   底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

●   加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 

试剂的准备 

1.   标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

200

ng/ml

6号标准品)

原倍浓度不用稀释直接加入50ul

100

ng/ml

5号标准品)

100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

50

ng/ml

4号标准品)

100ul5号标准品加入100ul的标准品稀释液

25

ng/ml

3号标准品)

100ul4号标准品加入100ul的标准品稀释液

12.5

ng/ml

2号标准品)

100ul3号标准品加入100ul的标准品稀释液

6.25

ng/ml

1号标准品)

100ul2号标准品加入100ul的标准品稀释液

0

ng/ml

(空白对照)

原倍浓度不用稀释直接加入50ul

 2.   洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。 

试剂盒性能 

1.   灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990

2.   特异性:不与其它细胞因子反应。

3.   重复性:板内、板间变异系数均小于10%

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