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培养基操作原理

阅读次数:818发布时间:2019/8/20 11:27:00

    转眼,八月也要即将结束了,往期内容中给大家带来了ELISA实验中常见的一些问题,今天给大家分享的是培养基的原理及其相关应用!

    实验原理:
    培养基(culture medium)是根据微生物生长繁殖所需要的一定比例的营养物质(碳源、氮源等)、氢离子浓度(pH值)以及渗透压等条件,用人工方法制成的无菌营养基质。主要用于微生物分离培养、生化鉴定和保存菌种等。培养基按物理性状不同可分为固体、半固体和液体培养基;按性质和用途不同又可细分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和特殊培养基。根据物理性状和用途等不同常将培养基分装于试管或平皿等容器中。

    常用培养基制备的一般程序是:调配成分溶解→较正pH值→过滤→分装→灭菌→质量检验→保存。配制培养基时可以按照培养基配方调配各种基本成分,也可购买半成品的商品培养基干粉制剂直接配制。

    应用技术:
    1.培养基的脱氧:必要时,将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min;加热时松开容器的盖子;加热后盖紧,并迅速冷却至使用温度。

    2.添加成分的加入:对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃~50℃时再加入。无菌的添加成分在加入前应先放置到室温,避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀,尽快分装到待用的容器中。

    常见问题解答:
    1.培养基的有效期一般可以控制在多长时间?
    答:无菌检查的培养基贮存期限可参见药典规定。微生物限度检查的培养基,应对保存期进行验证。

    2.培养基适用性检查中,五种菌液是否都要制备使用?
    答:计数培养基的适用性检查五种试验菌均应使用。

    3.如何准确方便的控制培养基的PH值?
    答:在灭菌前测定和调节培养基的pH值。

    4.培养基在灭菌后测其PH值,像营养琼脂在冷却到室温25℃时已经凝结,该如何测定?
    答:在灭菌前测定何调节pH值。

    5.厂家已做过适用性检查的,是否还需进行适用性检查?
    答:厂家的适用性检查不能代表某个特定的实验室,实验室在购入培养基后,应根据本实验室的配制和灭菌方法进行适用性检查。

    保存方法:
    制备好且标记清楚的培养基置于4 ℃冰箱保存备用,严格灭菌后的培养基一般可保存1周以上,但不宜过久。注意平板培养基应底上盖下倒置保存,以防止盖内水蒸汽落在培养基表面,使得培养基表面粘滞易污染且不易接种;液体、半固体等培养基应直立保存。

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原创作者:上海劲马实验设备有限公司

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