万经理讲说上海劲马非一般的试剂盒

阅读次数：630发布时间：2018/9/19 14:59:43

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ELISA检测试剂盒原理

        应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

    不同厂家的试剂盒的检测范围并不相同，一般说来，诊断试剂的检测范围以ng/ml计。而常见的科研试剂盒中的样本中的目标蛋白，范围可随样本的类型而变化。所以实验前应通过文献和预实验的方法确定样本是否在所购试剂盒的范围内，如果不在检测范围内，分两种情况对待。

 1. 如果样本中目标蛋白太低，需找相应灵敏度更高的试剂盒来检测或浓缩样本；

 2. 如果样本中目标蛋白太高，则需要进一步稀释后进行检测。
        

        1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

        组织匀浆液的样本，要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解，造成检测结果的值偏低。因组织匀浆液的样本蛋白种类多，含量丰富，实验参照血清血浆标本的处理方法进行，否则就会影响实验结果。具体是加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，需稀释时，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。

        因为目标蛋白不同，可能造成降解的蛋白类型可能不一样，如果实验前通过文献确定用哪种蛋白酶抑制剂，有针对性加入，可节省抑制剂。如果查不到相关文献，可采用组合抑制的办法确保蛋白不易被降解。
        

 

原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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