九月学习:最新ELISA试剂盒技术资料

阅读次数：624发布时间：2018/9/12 11:49:45

        新学期已经进行两周了，九月也近乎中旬，那么面对新学期的开始，是不是让不少ELISA实 验的新手同学们有点儿手足无措呢？下面一起来看下上海劲马今天为您分享的实验内容吧，九 月学习：最新ELISA试剂盒技术资料。

·DIY夹心法ELISA常见技术指南
       选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位 的抗体；最好从同一家公司选择抗体对。ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗 体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在 适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。标准品的配制：对 于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶， 尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。

       一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到 15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一 定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议放置一个晚上孵育标准品和标本。若使用过氧化 物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当 测定混合液体中的抗原时。
         
·ELISA用处
1. 将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的 抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。
2. 实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对 其进行定量。
3. 其抗原抗体反应具有高度的特异性。
4. 为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置。

·灰区的设置
通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有一条分界线被称 为“阳性判断值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

·标本复查
ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结 果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、 HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

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原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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