上海劲马对ELISA洗涤次数做出的心得点评

阅读次数：628发布时间：2018/5/9 9:39:19

        我们都知道，在ELISA实验操作中，洗涤是一大重点步骤。这一流程主要作用是可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。但是，不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。那么在ELISA洗涤步骤中需要怎样正确操作呢？需要洗涤几次？
                     
        据上海劲马实验设备有限公司技术专员介绍：ELISA通常在96孔板中开展，其上包被了结合抗原或抗体。在封闭步骤后，包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。随后通过一些洗涤步骤去除未结合(低亲和力)的抗原-抗体复合物。接着，平板与二抗孵育。这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。之后，又是一轮洗涤。最后是添加底物并检测信号。

        洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，ELISA板的制造商会对洗涤次数提出建议。一般而言，制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。

        控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 μl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1ml。它是如何做到的呢？其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。
相信在您的悉心优化下，很快就能做出漂亮的ELISA实验结果。以上是上海劲马对ELISA洗涤次数做出的心得点评，如需了解相关技术问题，欢迎您随时联系我司业务员。

原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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